一、校準(zhǔn)的重要性
確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性
校準(zhǔn)能夠消除因光學(xué)元件老化、電子漂移或環(huán)境變化所帶來的系統(tǒng)誤差，使每次測量都基于真實的標(biāo)準(zhǔn)基準(zhǔn)進(jìn)行比較。提高分析結(jié)果的可重復(fù)性
多批次、多儀器之間的數(shù)據(jù)一致性依賴于標(biāo)準(zhǔn)化的校準(zhǔn)方法，減少人為和系統(tǒng)因素帶來的差異。符合監(jiān)管要求
GMP、GLP、ISO等法規(guī)體系要求對分析設(shè)備進(jìn)行定期校準(zhǔn)，并留存完整的操作記錄與驗證報告。提升儀器性能壽命
通過校準(zhǔn)發(fā)現(xiàn)并預(yù)警潛在硬件問題，有助于延長設(shè)備壽命并降低維護(hù)成本。
二、賽默飛3500校準(zhǔn)方式概述
賽默飛Evolution 3500支持多種自動或手動校準(zhǔn)方式，包括：
波長校準(zhǔn)
光度準(zhǔn)確度校準(zhǔn)（吸光度）
雜散光校準(zhǔn)
分辨率校準(zhǔn)
基線校準(zhǔn)與背景校正
噪聲與漂移校準(zhǔn)
量程線性校準(zhǔn)
多點定量校準(zhǔn)（定標(biāo)曲線）
每種校準(zhǔn)方式針對儀器性能的不同方面，需根據(jù)使用頻率、測量精度和法規(guī)要求設(shè)定周期性維護(hù)計劃。
三、波長校準(zhǔn)
1. 原理
通過識別已知標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)發(fā)出的特定波長信號，將儀器光柵調(diào)節(jié)系統(tǒng)檢測的實際波長與理論值進(jìn)行比較，對存在的偏差進(jìn)行修正。
2. 操作流程
打開軟件（如INSIGHT或OMNIC）并選擇“波長校準(zhǔn)”功能。
插入標(biāo)準(zhǔn)濾光片（如鈥玻璃）或啟動汞燈。
掃描已知波長區(qū)域（如200~700nm）。
軟件自動匹配標(biāo)準(zhǔn)譜線，計算偏差。
偏差在允許范圍（±0.3nm）內(nèi)為合格，超出則自動調(diào)節(jié)光柵系統(tǒng)。
3. 常用標(biāo)準(zhǔn)
| 參考源 | 標(biāo)準(zhǔn)波長（nm） |
|---|---|
| 鈥玻璃 | 361, 486, 536, 638 |
| 汞燈 | 253.7, 365, 435.8, 546.1 |
四、光度校準(zhǔn)（吸光度準(zhǔn)確度）
1. 原理
使用已知吸光度值的標(biāo)準(zhǔn)溶液或濾光片對儀器測得吸光度進(jìn)行比對，評估其測量精度。
2. 操作方法
準(zhǔn)備一系列標(biāo)準(zhǔn)吸光度濾片（如0.2A, 0.5A, 1.0A等）或校準(zhǔn)溶液（如鉀二鉻酸鹽、鈷/鎳標(biāo)準(zhǔn)液）。
在特定波長（如235nm、257nm、440nm）處測量其吸光度。
與證書標(biāo)準(zhǔn)值比較，允許誤差一般為±0.005~±0.010A。
記錄各項偏差，并保存校準(zhǔn)報告。
3. 適用范圍
適用于定量分析和方法驗證的實驗室使用，尤其重要于藥物濃度測量與法定檢測場合。
五、雜散光校準(zhǔn)
1. 原理
雜散光是指非目標(biāo)波長光線的干擾信號，會導(dǎo)致低吸光度樣品測試誤差增大。該校準(zhǔn)用于檢測并評估雜散光水平。
2. 校準(zhǔn)材料與波長設(shè)置
| 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) | 波長區(qū)域 | 預(yù)期吸光度 |
|---|---|---|
| 鈉硝酸鹽溶液 | 220 nm | >2.0 |
| 鉀氯化物溶液 | 200 nm | >1.5 |
| 乙醛溶液 | 270 nm | >3.0 |
3. 操作說明
將標(biāo)準(zhǔn)溶液放入比色皿。
掃描目標(biāo)波長下的吸光度。
若吸光度遠(yuǎn)低于標(biāo)準(zhǔn)，說明存在雜散光問題，需檢查光學(xué)元件或更換光源。
六、分辨率校準(zhǔn)
1. 目的
檢測儀器是否能分辨相鄰兩個非常接近的光譜峰。分辨率不良可能導(dǎo)致峰重疊、定性錯誤。
2. 校準(zhǔn)方法
使用苯、甲苯、鈥玻璃等標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。
在255nm附近掃描苯的紫外吸收峰。
分析主峰與肩峰的波長差異與谷深度，計算分辨比。
通常要求分辨比大于1.5，峰距＞1.0nm。
七、基線校準(zhǔn)與背景校正
1. 作用
確保儀器在無樣品狀態(tài)下的信號為“零”或近零狀態(tài)，以消除基線漂移。
2. 操作流程
清空比色架，插入空白比色皿。
啟動“背景校正”功能。
系統(tǒng)自動掃描當(dāng)前背景噪聲并設(shè)為零基線。
執(zhí)行時間范圍內(nèi)的基線穩(wěn)定性觀察。
八、噪聲與穩(wěn)定性測試
1. 噪聲校準(zhǔn)
在無樣品條件下設(shè)定波長（如500nm）并連續(xù)讀取空白吸光度。
噪聲值應(yīng)小于±0.001A（視型號而定）。
2. 漂移校準(zhǔn)
記錄某一波長處的吸光度連續(xù)變化（30分鐘或以上）。
判斷是否存在趨勢性偏移，指標(biāo)應(yīng)符合技術(shù)手冊要求。
九、量程線性與定量校準(zhǔn)
1. 線性測試
使用一組不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（例如鉀二鉻酸鹽、銅離子等）。
在目標(biāo)波長下測定吸光度并繪制濃度-吸光度曲線。
計算線性回歸系數(shù)R2，應(yīng)大于0.999。
2. 多點定量校準(zhǔn)
用軟件內(nèi)建功能設(shè)定多點標(biāo)準(zhǔn)曲線。
自動生成斜率、截距、回歸系數(shù)，作為定量依據(jù)。
存檔用于日常樣品濃度推算。
十、校準(zhǔn)周期與建議
| 校準(zhǔn)類型 | 推薦頻率 |
|---|---|
| 波長校準(zhǔn) | 每周或每次關(guān)鍵實驗前 |
| 吸光度校準(zhǔn) | 每月一次或換燈后執(zhí)行 |
| 雜散光校準(zhǔn) | 每季度一次 |
| 分辨率校準(zhǔn) | 每季度一次 |
| 定量校準(zhǔn) | 每次實驗前或方法建立時 |
| 噪聲測試 | 每月一次 |
| 背景校正 | 每次實驗前 |
所有校準(zhǔn)操作均應(yīng)有詳細(xì)記錄，并納入儀器使用檔案。
十一、常見問題與處理策略
| 問題 | 可能原因 | 解決方法 |
|---|---|---|
| 波長偏移嚴(yán)重 | 光柵松動、光源老化 | 重新校準(zhǔn)光柵系統(tǒng)，更換光源 |
| 吸光度不準(zhǔn) | 濾片污染、光源穩(wěn)定性差 | 清潔濾片，檢查燈源 |
| 雜散光大 | 光學(xué)腔污染、窗口劃傷 | 清潔光學(xué)部件，必要時聯(lián)系維修 |
| 線性回歸系數(shù)低 | 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備誤差大 | 重新配制標(biāo)準(zhǔn)液，嚴(yán)格操作規(guī)程 |
| 背景漂移頻繁 | 環(huán)境溫度變化、電子噪聲干擾 | 保持室溫穩(wěn)定，檢查電源干擾 |
十二、總結(jié)
賽默飛3500系列分光光度計提供了多種完善的校準(zhǔn)方式，涵蓋從基礎(chǔ)波長到高階定量測量的全方位儀器驗證機(jī)制。掌握這些校準(zhǔn)技術(shù)，不僅可以有效提升測量精度，還能幫助實驗室在質(zhì)量管理和審計合規(guī)中占據(jù)主動。建議實驗室建立標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），指定專人執(zhí)行定期校準(zhǔn)，并形成閉環(huán)管理流程。通過科學(xué)系統(tǒng)的校準(zhǔn)維護(hù)，儀器可持續(xù)提供穩(wěn)定、高質(zhì)量的數(shù)據(jù)支持，為各類分析任務(wù)提供可靠保障。
