賽默飛分光光度計(jì)NanoDrop Eight校準(zhǔn)方法

一、引言

NanoDrop Eight分光光度計(jì)是賽默飛世爾科技推出的一款高通量微量檢測(cè)設(shè)備，能夠同時(shí)完成八個(gè)樣品的核酸、蛋白質(zhì)及其他分子檢測(cè)。為了確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性與可重復(fù)性，定期進(jìn)行校準(zhǔn)是必不可少的環(huán)節(jié)。校準(zhǔn)不僅能保證儀器讀數(shù)與真實(shí)值的偏差最小化，還能延長(zhǎng)設(shè)備使用壽命并降低實(shí)驗(yàn)失敗率。

二、校準(zhǔn)的重要性

1. 確保檢測(cè)準(zhǔn)確性

儀器在長(zhǎng)時(shí)間使用后可能會(huì)因光源衰減、檢測(cè)器靈敏度變化或樣品殘留造成偏差，校準(zhǔn)能有效修正這些誤差。

2. 保證實(shí)驗(yàn)可比性

不同批次樣品或不同實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)需要具有可比性，校準(zhǔn)能夠確保不同條件下的數(shù)據(jù)一致。

3. 符合質(zhì)量管理要求

在臨床實(shí)驗(yàn)室、藥物研發(fā)和食品檢測(cè)等領(lǐng)域，符合ISO或GLP等質(zhì)量體系的要求，必須定期執(zhí)行校準(zhǔn)與驗(yàn)證。

三、NanoDrop Eight的校準(zhǔn)需求

1. 光學(xué)系統(tǒng)

NanoDrop Eight采用190–850 nm的寬波長(zhǎng)范圍，光源及檢測(cè)器需要定期檢查，保證波長(zhǎng)精度與光強(qiáng)穩(wěn)定。

2. 樣品臺(tái)檢測(cè)點(diǎn)

樣品直接滴加于檢測(cè)點(diǎn)進(jìn)行分析，長(zhǎng)時(shí)間使用可能出現(xiàn)透光率變化，因此需通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校準(zhǔn)其光學(xué)性能。

3. 軟件計(jì)算算法

儀器內(nèi)部算法會(huì)根據(jù)吸光度自動(dòng)計(jì)算濃度和純度比值，定期通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)確認(rèn)計(jì)算準(zhǔn)確性同樣重要。

四、校準(zhǔn)前的準(zhǔn)備工作

1. 清潔與檢查

• 使用去離子水和無(wú)水乙醇清潔檢測(cè)點(diǎn)。

• 檢查樣品臺(tái)是否有劃痕或污染。

• 確保檢測(cè)區(qū)域干燥無(wú)殘液。

2. 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)準(zhǔn)備

• 空白溶液：與實(shí)驗(yàn)相同的緩沖液或純水。

• 核酸標(biāo)準(zhǔn)品：已知濃度與純度的DNA/RNA溶液。

• 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品：常用BSA（牛血清白蛋白）作為參考物。

• 光學(xué)標(biāo)準(zhǔn)液：可選購(gòu)賽默飛或第三方提供的校準(zhǔn)溶液。

3. 軟件設(shè)置

• 進(jìn)入NanoDrop Eight控制軟件，選擇“校準(zhǔn)”或“驗(yàn)證”功能。

• 建立對(duì)應(yīng)的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，輸入標(biāo)準(zhǔn)品參數(shù)。

五、具體校準(zhǔn)方法

1. 空白校準(zhǔn)

• 目的：消除溶劑或緩沖液背景影響。

• 方法：在樣品點(diǎn)滴加2 μL空白溶液，選擇“空白測(cè)定”。

• 要求：空白吸光度應(yīng)接近0，若背景異常則需重新清潔。

2. 波長(zhǎng)校準(zhǔn)

• 目的：確保波長(zhǎng)定位準(zhǔn)確。

• 方法：使用標(biāo)準(zhǔn)光學(xué)濾光片或光學(xué)校準(zhǔn)液體，在特定波長(zhǎng)下檢測(cè)吸收峰位置。

• 結(jié)果：與理論值差異應(yīng)小于±1 nm。

3. 吸光度校準(zhǔn)

• 目的：保證不同濃度下吸光度響應(yīng)線性。

• 方法：利用不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制吸光度—濃度曲線。

• 判定：R2值應(yīng)接近1.000，偏差小于5%。

4. 核酸檢測(cè)校準(zhǔn)

• 使用已知濃度DNA/RNA標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè)。

• 比較實(shí)測(cè)值與理論值差異。

• 檢查260/280、260/230比值是否合理（DNA約1.8，RNA約2.0）。

5. 蛋白質(zhì)檢測(cè)校準(zhǔn)

• 使用BSA溶液進(jìn)行多點(diǎn)濃度測(cè)定。

• 結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì)，若偏差較大需重新校正或更換光源。

六、不同實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ降男?zhǔn)方案

1. 單點(diǎn)檢測(cè)模式

適合常規(guī)核酸、蛋白質(zhì)快速檢測(cè)，校準(zhǔn)時(shí)主要關(guān)注濃度與純度比值。

2. 多通道批量檢測(cè)模式

• 建議同時(shí)檢測(cè)8個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品，保證各通道一致性。

• 若某一通道出現(xiàn)偏差，應(yīng)重點(diǎn)檢查該檢測(cè)點(diǎn)的光學(xué)性能。

3. 時(shí)間掃描模式

• 校準(zhǔn)時(shí)可使用穩(wěn)定吸收峰的溶液，確保數(shù)據(jù)在時(shí)間維度的穩(wěn)定性。

七、常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案

1. 校準(zhǔn)數(shù)據(jù)不穩(wěn)定

• 原因：檢測(cè)點(diǎn)殘留、樣品未覆蓋檢測(cè)窗。

• 解決：清潔樣品臺(tái)，確保樣品體積充足。

2. 校準(zhǔn)結(jié)果偏差大

• 原因：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度不準(zhǔn)或降解。

• 解決：更換新鮮標(biāo)準(zhǔn)品，避免多次凍融。

3. 不同通道讀數(shù)差異明顯

• 原因：部分檢測(cè)點(diǎn)表面損傷或光路異常。

• 解決：檢查并更換相應(yīng)部件，聯(lián)系技術(shù)服務(wù)人員。

八、維護(hù)與優(yōu)化建議

1. 定期校準(zhǔn)頻率：建議每周執(zhí)行一次空白與標(biāo)準(zhǔn)樣品校準(zhǔn)；每月進(jìn)行一次全面光學(xué)校準(zhǔn)。

2. 使用合格耗材：采用賽默飛推薦的標(biāo)準(zhǔn)品與校準(zhǔn)液，減少誤差。

3. 數(shù)據(jù)記錄：保存所有校準(zhǔn)結(jié)果，建立校準(zhǔn)檔案，便于質(zhì)量追溯。

4. 人員培訓(xùn)：確保操作者熟悉校準(zhǔn)步驟與判定標(biāo)準(zhǔn)。

九、未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)

1. 自動(dòng)化校準(zhǔn)：未來(lái)NanoDrop系列可能配備自動(dòng)加樣與標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)模塊，減少人工干預(yù)。

2. 智能化算法：結(jié)合AI實(shí)時(shí)修正波長(zhǎng)與吸光度偏差。

3. 云端數(shù)據(jù)管理：校準(zhǔn)記錄上傳至云端，便于多實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)比對(duì)與共享。

4. 診斷級(jí)應(yīng)用：在臨床檢測(cè)中實(shí)現(xiàn)自動(dòng)校準(zhǔn)與結(jié)果溯源，提高醫(yī)學(xué)檢測(cè)可靠性。

十、結(jié)語(yǔ)

賽默飛NanoDrop Eight分光光度計(jì)作為高通量微量檢測(cè)的先進(jìn)設(shè)備，其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性依賴于科學(xué)合理的校準(zhǔn)。通過(guò)空白校準(zhǔn)、波長(zhǎng)校準(zhǔn)、吸光度校準(zhǔn)及核酸與蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品校準(zhǔn)，用戶能夠確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性。合理的校準(zhǔn)方案不僅能滿足科研需求，也能符合質(zhì)量管理體系的要求。未來(lái)，隨著自動(dòng)化與智能化的發(fā)展，NanoDrop Eight的校準(zhǔn)方法將更加高效便捷，為科研、臨床和應(yīng)用檢測(cè)提供堅(jiān)實(shí)保障。