賽默飛分光光度計(jì)NanoDrop Eight參數(shù)設(shè)置

詳情

賽默飛分光光度計(jì) NanoDrop Eight 參數(shù)設(shè)置詳解

一、前言

分子生物學(xué)與生命科學(xué)研究對(duì)核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子的定量與純度分析要求越來越高。賽默飛 NanoDrop Eight 作為一款高通量分光光度計(jì)，具備同時(shí)檢測(cè)八個(gè)樣品的能力，在科研實(shí)驗(yàn)室和工業(yè)應(yīng)用中廣泛應(yīng)用。要想充分發(fā)揮儀器性能，合理的參數(shù)設(shè)置是確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性與可重復(fù)性的關(guān)鍵。

本文將全面解析 NanoDrop Eight 的參數(shù)設(shè)置方法，幫助用戶根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜆悠奉愋瓦x擇合適的配置，從而提升檢測(cè)效率與結(jié)果可靠性。

二、NanoDrop Eight 儀器概述

檢測(cè)原理

基于紫外-可見分光光度法，通過檢測(cè)樣品在 190–850 nm 波段的吸光度來實(shí)現(xiàn)定量與純度分析。
利用比爾-朗伯定律（A=εcl），根據(jù)吸光度計(jì)算濃度。

主要功能

同時(shí)測(cè)定 8 個(gè)樣品，支持 DNA、RNA、蛋白質(zhì)及其他生物樣品分析。
自動(dòng)計(jì)算常見比值（A260/A280、A260/A230、260/280）。
輸出全波段光譜曲線，輔助判斷樣品質(zhì)量。

應(yīng)用范圍

分子克隆、基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究。
蛋白質(zhì)表達(dá)與純化監(jiān)控。
藥物與生物制品研發(fā)中的質(zhì)量控制。
環(huán)境與食品檢測(cè)。

三、核心參數(shù)分類

NanoDrop Eight 的參數(shù)設(shè)置主要包括以下幾個(gè)維度：

1. 波長(zhǎng)參數(shù)

檢測(cè)波長(zhǎng)范圍：190–850 nm。
常用波長(zhǎng)點(diǎn)：

核酸：260 nm。
蛋白質(zhì)：280 nm。
污染物：230 nm（有機(jī)物、鹽類）、320 nm（渾濁背景）。

設(shè)置方法：

可選擇單點(diǎn)檢測(cè)或全波段掃描。
全波段掃描更適合雜質(zhì)分析。

2. 光程長(zhǎng)度（Pathlength）

NanoDrop Eight 采用自動(dòng)光程調(diào)節(jié)技術(shù)。
常見光程：1 mm、0.2 mm。
適用場(chǎng)景：

高濃度樣品：自動(dòng)縮短光程，避免超出檢測(cè)范圍。
稀釋樣品：采用 1 mm 光程，保證信號(hào)強(qiáng)度。

3. 積分時(shí)間與信噪比

積分時(shí)間：光電檢測(cè)器對(duì)信號(hào)采集的時(shí)間。
設(shè)置原則：

積分時(shí)間越長(zhǎng)，信噪比越高，但檢測(cè)時(shí)間延長(zhǎng)。
一般保持默認(rèn)自動(dòng)模式，特殊情況下可手動(dòng)調(diào)整。

4. 樣品體積

推薦體積：1–2 μL。
參數(shù)含義：過少樣品可能無法形成穩(wěn)定液滴，過多則易污染探頭。

5. 空白對(duì)照（Blank）

對(duì)照液參數(shù)必須與樣品溶液一致。
通過 blank 校正背景吸收，確保結(jié)果準(zhǔn)確。

6. 結(jié)果計(jì)算參數(shù)

核酸濃度換算公式：

dsDNA：1 A260 = 50 μg/mL。
ssDNA：1 A260 = 33 μg/mL。
RNA：1 A260 = 40 μg/mL。

蛋白質(zhì)換算：根據(jù)摩爾消光系數(shù) ε 與分子量計(jì)算。

四、不同應(yīng)用場(chǎng)景下的參數(shù)設(shè)置

1. DNA 測(cè)定

波長(zhǎng)范圍：230–320 nm（全掃描）。
關(guān)鍵比值：A260/A280 ≈ 1.8。
光程：自動(dòng)調(diào)節(jié)，避免高濃度飽和。
注意事項(xiàng)：若存在 RNase、蛋白質(zhì)污染，比值會(huì)下降。

2. RNA 測(cè)定

波長(zhǎng)范圍：230–320 nm。
關(guān)鍵比值：A260/A280 ≈ 2.0。
參數(shù)設(shè)置：建議全波段掃描，避免因降解片段干擾判斷。

3. 蛋白質(zhì)測(cè)定

波長(zhǎng)點(diǎn)：280 nm。
光程：自動(dòng)選擇。
參數(shù)：若已知分子量和消光系數(shù)，可輸入計(jì)算更精確濃度。

4. 酶活性與動(dòng)力學(xué)

波長(zhǎng)選擇：根據(jù)底物或產(chǎn)物的特征吸收峰（如 PNPP 在 405 nm）。
積分時(shí)間：適當(dāng)延長(zhǎng)，提高曲線平滑度。
測(cè)定模式：連續(xù)采集模式。

5. 環(huán)境與食品樣品

波長(zhǎng)范圍：190–850 nm 全掃描。
參數(shù)重點(diǎn)：關(guān)注 230 nm 和 320 nm，判斷污染物或渾濁度。

五、操作流程中的參數(shù)設(shè)置步驟

開機(jī)與軟件啟動(dòng)

系統(tǒng)自檢完成后進(jìn)入主界面。

選擇檢測(cè)模式

DNA、RNA、蛋白質(zhì)、全波段掃描等。

設(shè)置檢測(cè)波長(zhǎng)與光程

默認(rèn)自動(dòng)模式，可根據(jù)需求調(diào)整。

設(shè)置樣品體積與空白對(duì)照

輸入樣品體積參數(shù)。
用溶劑做 blank。

輸入計(jì)算參數(shù)

核酸類型（dsDNA、RNA 等）。
蛋白質(zhì)消光系數(shù)與分子量。

運(yùn)行測(cè)定

依次加載 8 個(gè)樣品，點(diǎn)擊“開始”。

結(jié)果顯示與保存

輸出濃度值、比值與光譜曲線。
導(dǎo)出為 CSV、PDF 或數(shù)據(jù)庫(kù)保存。

六、結(jié)果解讀

核酸樣品

A260/A280 = 1.8–2.0：純度高。
<1.8：蛋白污染。
A260/A230 <1.8：鹽類或酚類殘留。

蛋白質(zhì)樣品

A260/A280 ≈ 0.6：較為純凈。
0.8：可能有核酸殘留。

光譜曲線

平滑、峰值明確為理想結(jié)果。
若出現(xiàn)多個(gè)異常峰，提示雜質(zhì)或緩沖液干擾。

七、常見問題與解決方法

結(jié)果不穩(wěn)定

檢查光程是否過短，或樣品是否存在氣泡。

比值異常

重新提取或純化樣品，排除污染。

檢測(cè)失敗

樣品體積不足或探頭未清潔。

數(shù)據(jù)偏高

樣品過濃導(dǎo)致飽和，應(yīng)稀釋檢測(cè)。

八、維護(hù)與優(yōu)化建議

探頭清潔

每次檢測(cè)后用去離子水與無絨紙擦拭。

光源維護(hù)

定期檢查氘燈與鎢燈使用時(shí)長(zhǎng)。

軟件升級(jí)

保持最新版本，確保參數(shù)計(jì)算正確。

參數(shù)模板化

將常用參數(shù)保存為模板，提高重復(fù)實(shí)驗(yàn)效率。

九、應(yīng)用案例

案例一：RNA-Seq 前質(zhì)量控制

參數(shù)設(shè)置：波長(zhǎng)范圍 230–320 nm，全波段掃描。
結(jié)果：A260/A280 = 2.01，A260/A230 = 2.05，表明純度良好。

案例二：重組蛋白純化檢測(cè)

參數(shù)設(shè)置：波長(zhǎng)點(diǎn) 280 nm，輸入分子量和 ε 值。
結(jié)果：濃度 = 3.2 mg/mL，A260/A280 = 0.65，說明核酸污染可忽略。

案例三：環(huán)境水樣核酸分析

參數(shù)設(shè)置：190–850 nm 全波段掃描。
結(jié)果：在 230 nm 出現(xiàn)明顯吸收峰，提示有機(jī)物殘留。

十、總結(jié)

賽默飛 NanoDrop Eight 的參數(shù)設(shè)置是保證檢測(cè)結(jié)果可靠性的核心環(huán)節(jié)。通過合理調(diào)整波長(zhǎng)、光程、積分時(shí)間、樣品體積及對(duì)照等參數(shù)，科研人員能夠在不同實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景下獲得精準(zhǔn)、可重復(fù)的結(jié)果。