賽默飛分光光度計(jì)NanoDrop Eight實(shí)驗(yàn)流程

一、引言

NanoDrop Eight是賽默飛公司推出的八通道微量紫外-可見分光光度計(jì)，它繼承了NanoDrop系列的超微量檢測(cè)優(yōu)勢(shì)，并在通量和自動(dòng)化方面實(shí)現(xiàn)突破。該設(shè)備能在1–2 μL的樣品體積下快速完成核酸、蛋白質(zhì)等生物分子的濃度和純度分析，并支持八個(gè)樣品同時(shí)檢測(cè)。規(guī)范化的實(shí)驗(yàn)流程不僅能保證結(jié)果準(zhǔn)確可靠，還能提升實(shí)驗(yàn)室的整體效率。

二、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1. 儀器檢查

• 打開電源，確保系統(tǒng)正常啟動(dòng)。

• 等待開機(jī)自檢完成，檢查光源狀態(tài)是否正常。

• 確認(rèn)檢測(cè)平臺(tái)干凈無殘留液滴。

2. 耗材與工具

• 微量移液器及配套槍頭。

• 無核酸酶水或去離子水，用于清潔。

• 棉簽或無塵紙，用于擦拭檢測(cè)平臺(tái)。

• 樣品緩沖液或?qū)φ杖軇?，作為空白?duì)照。

3. 樣品準(zhǔn)備

• 核酸或蛋白樣品需溶于合適緩沖液。

• 確保樣品濃度處于NanoDrop Eight檢測(cè)范圍。

• 在檢測(cè)前輕輕混勻，避免沉淀和濃度梯度。

三、實(shí)驗(yàn)操作流程

1. 開機(jī)與軟件啟動(dòng)

• 啟動(dòng)NanoDrop Eight主機(jī)與操作軟件。

• 在界面中選擇實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ?，例如核酸定量、蛋白檢測(cè)或全光譜掃描。

2. 空白測(cè)定

• 使用溶解樣品的緩沖液作為空白。

• 在檢測(cè)平臺(tái)上加1–2 μL空白液，關(guān)閉上臂，點(diǎn)擊“Blank”。

• 系統(tǒng)自動(dòng)完成背景吸收扣除。

3. 樣品檢測(cè)

• 在檢測(cè)位置依次滴加樣品，每個(gè)位置1–2 μL。

• 放下上臂，點(diǎn)擊“Measure”，儀器會(huì)依次完成八個(gè)通道的檢測(cè)。

• 軟件自動(dòng)顯示濃度、260/280比值、260/230比值以及完整光譜。

4. 多輪檢測(cè)

• 若樣品數(shù)量大于八個(gè)，可分批次進(jìn)行。

• 每批次檢測(cè)前均需重新進(jìn)行空白測(cè)定，以保證準(zhǔn)確性。

5. 數(shù)據(jù)保存

• 每次測(cè)定結(jié)果自動(dòng)記錄，可批量導(dǎo)出為Excel、PDF等格式。

• 可直接上傳至實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)集中管理。

四、數(shù)據(jù)分析與結(jié)果解讀

1. 核酸檢測(cè)

• 濃度：根據(jù)A260值計(jì)算DNA或RNA濃度。

• 純度：260/280比值判斷蛋白污染；260/230比值判斷鹽類或酚污染。

• 光譜曲線：完整掃描幫助確認(rèn)是否存在雜質(zhì)峰。

2. 蛋白質(zhì)檢測(cè)

• A280法：直接檢測(cè)芳香族氨基酸吸收。

• 比色法：結(jié)合Bradford或BCA方法，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。

3. 數(shù)據(jù)可靠性判斷

• RSD（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差）<2%通常代表結(jié)果重復(fù)性良好。

• 若出現(xiàn)異常比值或光譜，應(yīng)重新檢測(cè)并檢查樣品質(zhì)量。

五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1. 加樣準(zhǔn)確：移液操作需穩(wěn)準(zhǔn)，保證樣品完全覆蓋光學(xué)平臺(tái)。

2. 防止交叉污染：每次檢測(cè)后必須清潔平臺(tái)，避免殘留干擾。

3. 空白選擇：必須與樣品溶劑一致，否則會(huì)引入系統(tǒng)誤差。

4. 環(huán)境要求：保持實(shí)驗(yàn)室溫度穩(wěn)定，避免強(qiáng)光直射。

5. 重復(fù)檢測(cè)：關(guān)鍵樣品建議至少三次測(cè)量取均值。

六、質(zhì)量控制與維護(hù)

1. 定期校準(zhǔn)

• 使用標(biāo)準(zhǔn)濾光片進(jìn)行波長校準(zhǔn)。

• 使用標(biāo)準(zhǔn)吸光度溶液進(jìn)行光度校準(zhǔn)。

2. 儀器自檢

• 每次開機(jī)后，系統(tǒng)自動(dòng)執(zhí)行光源和光學(xué)檢測(cè)。

• 若提示異常，應(yīng)停止實(shí)驗(yàn)并聯(lián)系維護(hù)人員。

3. 清潔與保養(yǎng)

• 每次實(shí)驗(yàn)后用去離子水擦拭平臺(tái)。

• 避免使用腐蝕性清潔劑，以免損壞光學(xué)部件。

• 定期更換易耗部件（如光源），保證長期穩(wěn)定性。

七、典型應(yīng)用流程案例

1. 質(zhì)粒DNA檢測(cè)

• 使用TE緩沖液作為空白。

• 測(cè)量結(jié)果：濃度符合轉(zhuǎn)染要求時(shí)可直接使用；若260/280比值偏低，應(yīng)進(jìn)一步純化。

2. RNA提取檢測(cè)

• 空白為無RNA酶水。

• 結(jié)果中若260/230比值低，提示鹽或酚污染，需要重復(fù)提取或純化。

3. 蛋白表達(dá)檢測(cè)

• 空白為PBS緩沖液。

• 通過A280法檢測(cè)蛋白濃度，并結(jié)合比色法交叉驗(yàn)證。

八、實(shí)驗(yàn)心得與經(jīng)驗(yàn)總結(jié)

1. NanoDrop Eight相比傳統(tǒng)單通道儀器，通量更高，效率提升顯著。

2. 微量加樣對(duì)操作者要求較高，操作熟練后可大幅提高重復(fù)性。

3. 在高通量測(cè)序建庫前，利用NanoDrop快速篩選RNA樣品，能有效節(jié)省測(cè)序成本。

4. 教學(xué)中使用NanoDrop Eight，學(xué)生能直觀理解核酸和蛋白質(zhì)的吸收特性，實(shí)驗(yàn)興趣更高。

5. 數(shù)據(jù)導(dǎo)出與LIMS對(duì)接，使實(shí)驗(yàn)室管理更加高效。

九、未來展望

隨著實(shí)驗(yàn)室智能化的發(fā)展，NanoDrop Eight的實(shí)驗(yàn)流程有望進(jìn)一步簡(jiǎn)化與升級(jí)：

• 自動(dòng)化加樣系統(tǒng)：減少人工誤差。

• 智能算法輔助：自動(dòng)識(shí)別異常光譜并給出修正建議。

• 遠(yuǎn)程數(shù)據(jù)監(jiān)控：實(shí)驗(yàn)結(jié)果可實(shí)時(shí)上傳云端，便于多團(tuán)隊(duì)共享。

• 集成質(zhì)控模塊：未來或可在每次檢測(cè)時(shí)自動(dòng)執(zhí)行精度驗(yàn)證。

十、結(jié)語

NanoDrop Eight為核酸、蛋白及多種生物樣品提供了快速、準(zhǔn)確和高效的檢測(cè)手段。規(guī)范化的實(shí)驗(yàn)流程涵蓋了從樣品準(zhǔn)備、檢測(cè)操作到結(jié)果解讀的完整步驟。通過嚴(yán)格的質(zhì)量控制和合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，該設(shè)備不僅提升了實(shí)驗(yàn)效率，也保證了檢測(cè)結(jié)果的可靠性。對(duì)于現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室而言，NanoDrop Eight已成為不可或缺的核心檢測(cè)平臺(tái)。