賽默飛分光光度計(jì)NanoDrop Eight使用方法詳解

一、引言

NanoDrop Eight是賽默飛公司推出的多通道微量分光光度計(jì)，具備一次同時(shí)檢測(cè)八個(gè)樣品的能力。其設(shè)計(jì)基于NanoDrop經(jīng)典平臺(tái)，采用微量樣品固定液滴方式，只需1–2 μL即可完成檢測(cè)，省去了傳統(tǒng)分光光度計(jì)對(duì)比色皿的依賴。NanoDrop Eight在核酸、蛋白質(zhì)以及其他生物分子的定量和純度分析中被廣泛使用。熟練掌握其使用方法，不僅能夠獲得準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，還能提高實(shí)驗(yàn)效率和可靠性。

二、NanoDrop Eight的儀器概述

1. 光學(xué)原理

• 光程通過(guò)液滴厚度控制，自動(dòng)調(diào)整（1 mm、0.2 mm、0.05 mm），確保濃度從低到高都能覆蓋。

• 檢測(cè)波長(zhǎng)范圍190–850 nm，滿足DNA、RNA、蛋白質(zhì)和小分子檢測(cè)需求。

2. 主要特點(diǎn)

• 微量檢測(cè)：僅需1–2 μL。

• 高通量：一次可檢測(cè)八個(gè)樣品。

• 寬動(dòng)態(tài)范圍：DNA可達(dá)2–27,500 ng/μL。

• 全波段掃描：用于檢測(cè)純度、結(jié)構(gòu)和雜質(zhì)。

3. 適用范圍

• 核酸定量及純度檢測(cè)。

• 蛋白質(zhì)定量和純度檢測(cè)。

• 藥物溶解度研究與復(fù)合物分析。

• 環(huán)境和食品樣品中的生物分子檢測(cè)。

三、使用前的準(zhǔn)備工作

1. 儀器檢查

• 確認(rèn)電源和操作系統(tǒng)運(yùn)行正常。

• 檢查光學(xué)平臺(tái)是否清潔無(wú)殘留。

• 確保軟件已啟動(dòng)并進(jìn)入檢測(cè)界面。

2. 樣品準(zhǔn)備

• 核酸、蛋白質(zhì)樣品需充分溶解，無(wú)沉淀和氣泡。

• 上樣前短暫離心，去除雜質(zhì)和氣泡。

• 濃度過(guò)高的樣品需要適當(dāng)稀釋。

3. 參比準(zhǔn)備

• 選擇與樣品一致的緩沖液作為空白對(duì)照。

• 先用參比進(jìn)行基線校正，再檢測(cè)樣品。

4. 環(huán)境條件

• 室溫保持在20–25 ℃之間。

• 避免陽(yáng)光直射與強(qiáng)烈震動(dòng)。

四、NanoDrop Eight的操作步驟

1. 啟動(dòng)與初始化

1. 打開(kāi)電源，等待軟件加載。

2. 選擇實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ剑ê怂?、蛋白、全波段等）?/p>

3. 檢查光源狀態(tài)，確認(rèn)校正功能可用。

2. 基線校正

1. 將1–2 μL緩沖液滴加到檢測(cè)平臺(tái)。

2. 關(guān)閉平臺(tái)，點(diǎn)擊“空白”按鈕。

3. 儀器自動(dòng)記錄基線，用于后續(xù)數(shù)據(jù)修正。

3. 樣品檢測(cè)

1. 使用移液槍吸取1–2 μL樣品。

2. 將樣品緩慢滴加到平臺(tái)，避免氣泡。

3. 關(guān)閉平臺(tái)，點(diǎn)擊“測(cè)量”按鈕。

4. 儀器自動(dòng)檢測(cè)并輸出濃度與純度比值。

5. 記錄或?qū)С鰯?shù)據(jù)。

4. 多通道檢測(cè)

• 將多個(gè)樣品分別滴加至八個(gè)通道。

• 批量點(diǎn)擊“測(cè)量”，儀器自動(dòng)完成同步檢測(cè)。

• 軟件自動(dòng)生成表格數(shù)據(jù)。

5. 清潔與復(fù)位

• 每次檢測(cè)后，用無(wú)絨布和去離子水或70%乙醇擦拭檢測(cè)平臺(tái)。

• 確認(rèn)無(wú)殘留后再進(jìn)行下一批次測(cè)量。

五、不同檢測(cè)模式的使用方法

1. 核酸檢測(cè)

• 適用范圍：DNA、RNA、寡核苷酸。

• 波長(zhǎng)選擇：260 nm為主要檢測(cè)點(diǎn)，230 nm與280 nm用于純度評(píng)價(jià)。

• 數(shù)據(jù)解讀：

• 260/280 ≈ 1.8：DNA純度良好。

• 260/280 ≈ 2.0：RNA純度理想。

• 260/230 在2.0–2.2：說(shuō)明鹽類(lèi)或有機(jī)溶劑污染較少。

2. 蛋白質(zhì)檢測(cè)

• 適用范圍：總蛋白、純化蛋白、標(biāo)簽蛋白。

• 波長(zhǎng)選擇：280 nm處芳香族氨基酸吸收。

• 數(shù)據(jù)解讀：

• 260/280 ≈ 0.57：純蛋白樣品。

• 若比值偏高，提示核酸污染。

3. 全波段掃描

• 范圍：190–850 nm。

• 應(yīng)用：檢測(cè)雜質(zhì)、蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)、小分子結(jié)合位點(diǎn)。

• 使用方法：選擇“掃描模式”，設(shè)定掃描范圍與分辨率，儀器輸出完整光譜曲線。

4. 高通量批量檢測(cè)

• 方法：八通道同時(shí)上樣，點(diǎn)擊批量測(cè)量。

• 優(yōu)勢(shì)：數(shù)據(jù)自動(dòng)整理，節(jié)省時(shí)間。

• 注意事項(xiàng)：確保每個(gè)通道樣品體積一致。

六、數(shù)據(jù)解讀與保存

1. 濃度計(jì)算
   軟件根據(jù)比爾-朗伯定律自動(dòng)計(jì)算樣品濃度，無(wú)需人工換算。

2. 純度比值

• 260/280：用于判斷核酸與蛋白質(zhì)純度。

• 260/230：用于評(píng)估鹽類(lèi)或有機(jī)物殘留。

3. 數(shù)據(jù)保存

• 可保存為Excel、PDF或原始光譜文件。

• 建議建立實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)庫(kù)，長(zhǎng)期追蹤樣品檢測(cè)記錄。

七、常見(jiàn)問(wèn)題與解決方法

1. 氣泡干擾

• 表現(xiàn)：結(jié)果波動(dòng)大或濃度異常高。

• 解決：樣品上樣前離心，移液槍垂直滴加。

2. 260/230比值偏低

• 原因：鹽類(lèi)、苯酚或胍鹽污染。

• 解決：重新純化樣品。

3. 濃度過(guò)高飽和

• 原因：光程縮短后仍超出檢測(cè)范圍。

• 解決：稀釋樣品后重新測(cè)量。