賽默飛分光光度計(jì) NanoDrop Eight 操作步驟詳解

一、引言

NanoDrop Eight 是 Thermo Fisher Scientific 推出的一款多通道超微量分光光度計(jì)，專為高通量檢測設(shè)計(jì)。它能夠在一次運(yùn)行中同時(shí)檢測 8 個(gè)樣品，樣品需求量僅需 1–2 微升，廣泛應(yīng)用于核酸、蛋白質(zhì)以及帶有熒光標(biāo)記物的分子定量分析。掌握其詳細(xì)操作步驟是確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的關(guān)鍵。本章將從開機(jī)準(zhǔn)備到結(jié)果導(dǎo)出，逐一解析操作流程。

二、操作前準(zhǔn)備

1. 設(shè)備檢查

• 確認(rèn)儀器電源、顯示屏及光學(xué)臂正常。

• 檢查檢測平臺是否干凈無殘留液體。

• 檢查八通道檢測孔是否無塵、無劃痕。

2. 環(huán)境要求

• 放置在穩(wěn)固的實(shí)驗(yàn)臺上，避免震動(dòng)。

• 室溫保持在 20–25℃，濕度適中。

• 避免陽光直射，保持干燥環(huán)境。

3. 樣品準(zhǔn)備

• 提前配制檢測所需的核酸、蛋白質(zhì)或其他樣品。

• 使用去離子水或?qū)?yīng)緩沖液作為空白對照。

• 樣品濃度不宜過高，如超出范圍需稀釋。

• 移液器、無酶吸頭、無核酸污染操作環(huán)境。

三、開機(jī)與初始化

1. 電源開啟
   接通電源后按下開關(guān)鍵，設(shè)備開始自檢。顯示屏?xí)詣?dòng)加載主界面。

2. 預(yù)熱光源
   初次開機(jī)或長時(shí)間未使用時(shí)，需預(yù)熱 2–3 分鐘以穩(wěn)定光源。

3. 軟件登錄
   選擇用戶賬號進(jìn)入系統(tǒng)界面，方便保存和區(qū)分?jǐn)?shù)據(jù)。

4. 基線校正

• 滴加 1–2 微升空白緩沖液于檢測平臺。

• 合上光學(xué)臂，選擇“Blank”進(jìn)行校正。

• 系統(tǒng)自動(dòng)記錄基線，保證后續(xù)結(jié)果準(zhǔn)確。

四、樣品檢測操作步驟

1. 樣品加載

• 使用移液器取 1–2 μL 樣品，緩慢滴加在檢測孔中央。

• 確保液滴覆蓋檢測窗口，避免氣泡或液體外溢。

• 對于多樣品檢測，可依次加載 8 個(gè)孔位。

2. 檢測模式選擇

NanoDrop Eight 內(nèi)置多種模式：

• 核酸模式：在 260 nm 檢測 DNA、RNA 濃度。

• 蛋白質(zhì)模式：在 280 nm 檢測蛋白濃度。

• 全波長掃描：190–850 nm，獲取完整光譜。

• 熒光染料模式：針對 Cy3、Cy5 等標(biāo)記物。

用戶根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇相應(yīng)模式。

3. 開始測定

• 合上光學(xué)臂，點(diǎn)擊“Start”。

• 儀器自動(dòng)進(jìn)行掃描，單次測定約需 5–10 秒。

• 結(jié)果包括吸光度、濃度、純度比值及光譜曲線。

4. 查看結(jié)果

• 濃度值：自動(dòng)計(jì)算并顯示。

• 純度比值：如 A260/A280、A260/A230，幫助評估樣品質(zhì)量。

• 光譜曲線：直觀展示吸收峰。

五、數(shù)據(jù)處理與導(dǎo)出

1. 保存結(jié)果

• 點(diǎn)擊“Save”，結(jié)果自動(dòng)存入系統(tǒng)存儲器。

• 可按樣品編號或日期進(jìn)行命名。

2. 導(dǎo)出數(shù)據(jù)

• USB 接口導(dǎo)出：生成 Excel 表格或 PDF 報(bào)告。

• 網(wǎng)絡(luò)接口導(dǎo)出：可直接傳輸至實(shí)驗(yàn)室服務(wù)器。

3. 批量處理

• 軟件支持多樣品曲線疊加對比。

• 自動(dòng)生成統(tǒng)計(jì)報(bào)告，含平均值、標(biāo)準(zhǔn)差。

六、常見問題與解決措施

1. 檢測值不穩(wěn)定

• 原因：液滴未完全覆蓋窗口或有氣泡。

• 解決：重新取樣，確保操作規(guī)范。

2. 純度比值偏低

• 原因：樣品中有鹽類、蛋白或有機(jī)物污染。

• 解決：重新提取或純化樣品。

3. 濃度過高提示

• 原因：樣品吸光度超出檢測范圍。

• 解決：稀釋后重新檢測。

4. 信號異常弱

• 原因：檢測平臺未清潔干凈。

• 解決：用無絨紙或去離子水清潔窗口。

七、日常維護(hù)

1. 清潔

• 每次測量后立即清潔檢測平臺。

• 使用去離子水或 70% 乙醇清洗，防止殘留。

2. 關(guān)機(jī)保養(yǎng)

• 長時(shí)間不使用應(yīng)關(guān)閉電源。

• 建議覆蓋防塵罩，避免灰塵進(jìn)入。

3. 校準(zhǔn)與檢測

• 定期進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測，確認(rèn)性能。

• 必要時(shí)聯(lián)系廠家進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)。

八、案例演示

1. RNA 檢測
   滴加 RNA 樣品 2 μL，結(jié)果顯示濃度 150 ng/μL，A260/A280 值為 2.0，表明純度良好。

2. 蛋白質(zhì)檢測
   檢測 BSA 溶液，結(jié)果濃度 2.4 mg/mL，符合實(shí)驗(yàn)預(yù)期。

3. 多樣品檢測
   同時(shí)加載 8 個(gè) DNA 樣品，短時(shí)間內(nèi)獲得完整檢測結(jié)果。

九、總結(jié)

NanoDrop Eight 的操作步驟簡潔明了，主要流程包括：

1. 操作前準(zhǔn)備與基線校正；

2. 樣品加載與模式選擇；

3. 自動(dòng)檢測與結(jié)果查看；

4. 數(shù)據(jù)保存與導(dǎo)出；

5. 清潔與維護(hù)。

其優(yōu)勢體現(xiàn)在：

• 樣品體積極小，避免浪費(fèi)；

• 八通道同時(shí)檢測，大幅提高效率；

• 檢測結(jié)果直觀可靠，便于數(shù)據(jù)管理；

• 適用于核酸、蛋白質(zhì)及多種標(biāo)記分子。

通過規(guī)范的操作步驟，NanoDrop Eight 能夠?yàn)榭蒲腥藛T提供高效、準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，成為分子生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的重要工具。