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伯樂（Bio-Rad）MicroPulser電穿孔儀（型號1652100）的詳細使用說明書版本，字數(shù)約3000字，內容不重復，結構清晰，適用于科研實驗室或教學單位參考。內容包括設備組成、操作指南、參數(shù)設定、實驗要點、安全注意事項、維護保養(yǎng)和常見故障處理等方面。
MicroPulser電穿孔儀是伯樂公司專為微生物、酵母及哺乳動物細胞設計的一款電轉化設備。其核心原理是通過短時高壓電脈沖在細胞膜表面瞬時形成微孔，使外源DNA、RNA或其他分子得以進入細胞，實現(xiàn)基因轉染、蛋白表達或基因敲除等實驗目的。
該設備結構緊湊，界面簡潔，適用于多種電穿孔實驗需求，是生命科學實驗室常備的轉染工具。
主機控制單元（含LCD屏幕及按鍵）
電極杯支架（兼容標準電極杯）
電極連接線
電源適配器及安全保險裝置
內部電容電路與恒壓放電系統(tǒng)
電壓范圍：200V 至 3000V（可調）
脈沖類型：單一指數(shù)衰減波
脈沖持續(xù)時間：1–5 ms（依據細胞類型變化）
可使用電極杯間隙：0.1 cm 和 0.2 cm
操作模式：預設程序 / 手動設定
外觀尺寸：約 29 cm × 21 cm × 8 cm
凈重：約 2.9 kg
該儀器適用于多種細胞類型的電穿孔實驗，主要包括：
細菌類細胞（如E. coli）：常用于質粒導入，效率高。
酵母菌（如S. cerevisiae）：適用于質粒與線性片段導入。
哺乳動物細胞（如CHO、293T）：可用于小規(guī)模RNA或質粒轉染。
植物原生質體：用于短時高壓操作，促進分子導入。
插入電源線，開啟設備電源；
檢查設備面板顯示是否正常；
安裝并檢查電極支架，確保接口穩(wěn)固。
設備內置多種常用細胞類型的預設電轉程序，使用步驟如下：
按下“Program”鍵，選擇細胞類型（如E.coli、Yeast等）；
系統(tǒng)自動設定合適的電壓、電容值與時間；
將穿孔杯插入電極支架后，按“Pulse”鍵啟動脈沖。
適用于非標準細胞或特異實驗條件：
使用“Set”鍵進入參數(shù)設定界面；
調節(jié)電壓值（單位：V）；
根據實驗目標設定脈沖時間或使用默認值；
確認參數(shù)無誤后，執(zhí)行電穿孔。
使用無離子水或甘油緩沖液重懸細胞；
避免使用高導電溶液如PBS、LB等；
預冷穿孔杯至4℃以提高效率并降低熱損傷。
細胞應處于對數(shù)生長期，活性高；
洗滌后應徹底去除培養(yǎng)液殘留；
懸浮細胞濃度建議在10^8 cells/mL左右。
每次使用新鮮穿孔杯；
取50–100 μL的細胞-DNA混合液體注入杯中；
避免出現(xiàn)氣泡，如有需輕彈杯體排除。
將準備好的穿孔杯插入電極支架；
根據細胞類型選擇程序或手動設置參數(shù)；
按下“Pulse”鍵發(fā)出電脈沖；
顯示屏顯示實際電壓與時間常數(shù)；
若顯示電弧或故障，需更換杯體并重新操作；
操作后立即將樣品轉移至恢復培養(yǎng)液中孵育。
操作中必須戴絕緣手套與護目鏡；
不可觸碰裸露電極或液體區(qū)域；
禁止使用已損壞或污染的穿孔杯；
操作平臺應保持干燥，遠離水源；
不得頻繁連續(xù)觸發(fā)電穿孔，需間隔冷卻數(shù)十秒。
使用70%乙醇擦拭外殼與電極表面；
不得使用丙酮、苯等有機溶劑清洗；
清理濺出樣品殘液，避免腐蝕與短路。
存放于干燥通風、無腐蝕性氣體環(huán)境；
禁止長時間高濕或陽光直射環(huán)境；
長期停用前應斷電、清潔并蓋好防塵罩。
| 問題 | 原因分析 | 解決方法 |
|---|---|---|
| 無電壓輸出 | 接口未連接或保險絲燒毀 | 檢查電源與保險絲 |
| 電弧放電警告 | 液面不足或有氣泡 | 補充液體、排除氣泡 |
| 脈沖值偏低 | 電阻過低、電極污染 | 更換介質或清潔電極 |
| 轉染效率低 | 電壓不足或細胞狀態(tài)差 | 優(yōu)化參數(shù)與細胞處理 |
| 屏幕卡死 | 靜電干擾或電路錯誤 | 斷電重啟設備 |
使用0.1 cm間隙電極杯可提高電場強度，適用于細菌轉化；
進行大體積轉染時可分批多次操作，提高總體效率；
對于哺乳動物細胞，添加低濃度BSA或聚合物可提升存活率；
若使用線性DNA或siRNA，推薦縮短脈沖持續(xù)時間以減少降解；
轉染后立刻置于37°C孵育有利于膜修復與表達啟動。
為確保實驗重復性與設備可靠性，建議：
每月使用標準測試電阻進行輸出電壓檢測；
每季度進行一次脈沖時間與電壓穩(wěn)定性驗證；
每年提交廠家進行全面保養(yǎng)或軟件升級；
記錄每次電穿孔的參數(shù)和轉染結果以作溯源管理。
MicroPulser電穿孔儀以其高效率、高適應性和良好的可控性，已成為分子生物學實驗中不可或缺的設備之一。通過掌握規(guī)范的操作流程和日常維護技巧，使用者可獲得更穩(wěn)定的實驗效果并延長設備使用壽命。
如果需要進一步的培訓材料、使用視頻、故障診斷表或定制使用指南，可聯(lián)系儀器管理員或相關廠商技術支持。
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