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質(zhì)保3年只換不修，廠家長沙實了個驗儀器制造有限公司

一、概述

伯樂（Bio-Rad）電穿孔儀165-2661是一款高精度的電轉(zhuǎn)化設(shè)備，用于將外源DNA、RNA或蛋白質(zhì)導(dǎo)入各種細(xì)胞體系中。其工作原理基于電場脈沖誘導(dǎo)細(xì)胞膜形成暫時性孔洞，從而實現(xiàn)物質(zhì)跨膜轉(zhuǎn)移。

由于該儀器在運行中涉及高電壓、高瞬時能量釋放與樣品生物活性控制，使用時必須嚴(yán)格遵守安全規(guī)范和操作規(guī)程。
本篇文檔將全面介紹165-2661在使用、維護(hù)、樣品處理及實驗環(huán)境方面的注意事項，確?？蒲腥藛T在保證實驗安全與準(zhǔn)確性的前提下，充分發(fā)揮儀器性能。

二、操作前的安全檢查

1. 環(huán)境要求

1. 溫度與濕度

• 建議操作環(huán)境溫度保持在20–25°C之間；

• 相對濕度應(yīng)低于60%；

• 避免在潮濕或結(jié)露環(huán)境下使用，以防電擊和電弧放電。

2. 工作臺條件

• 工作臺應(yīng)平整、堅固、干燥；

• 避免將儀器置于導(dǎo)電金屬臺面；

• 儀器周圍至少保持30 cm的通風(fēng)空間。

3. 電源條件

• 輸入電壓：AC 220V ±10%，50/60Hz；

• 接地電阻應(yīng)≤1 Ω；

• 嚴(yán)禁共用電源插座與加熱設(shè)備或高頻儀器。

4. 電磁干擾防護(hù)

• 遠(yuǎn)離強(qiáng)磁場、電焊機(jī)、高功率電機(jī)；

• 若實驗室存在射頻設(shè)備，應(yīng)保持距離≥1 m。

2. 儀器自檢

每次開機(jī)前，應(yīng)進(jìn)行以下檢查：

若發(fā)現(xiàn)異常，應(yīng)立即停止開機(jī)，檢查電源或聯(lián)系維護(hù)人員。

三、操作中的注意事項

1. 樣品準(zhǔn)備

1. 使用低離子濃度緩沖液（如10%甘油或HEPES溶液），禁止使用含鹽量高的PBS、NaCl等溶液。

• 高導(dǎo)電性會引發(fā)電弧，導(dǎo)致放電失敗和設(shè)備損壞。

2. 樣品體積需與電轉(zhuǎn)杯間隙匹配：

• 0.1 cm 間隙 → 20–40 μL；

• 0.2 cm 間隙 → 80–100 μL；

• 0.4 cm 間隙 → 300–400 μL。

3. 樣品中應(yīng)無氣泡。氣泡會導(dǎo)致局部電場集中，引發(fā)電弧放電。

4. 放電前必須將樣品充分冰浴預(yù)冷，降低電擊產(chǎn)生的熱效應(yīng)。

2. 參數(shù)設(shè)置

1. 設(shè)定電壓與電容應(yīng)依據(jù)細(xì)胞類型選擇，避免盲目提高電壓。

• 細(xì)菌體系：2.0–2.5 kV，25 μF；

• 酵母體系：1.2–1.5 kV，50 μF；

• 動物細(xì)胞：0.25–0.8 kV，250 μF。

• 常用參數(shù)：

2. 不同體系間的參數(shù)不可直接互換，需經(jīng)實驗驗證。

3. 在多次放電實驗中，連續(xù)操作間隔應(yīng)≥30秒，以防電容過熱。

4. 系統(tǒng)顯示“ARC DETECTED”時，立即終止實驗，重新檢查樣品電導(dǎo)率及電極狀態(tài)。

3. 放電執(zhí)行

1. 放電前務(wù)必確認(rèn)安全蓋關(guān)閉到位，儀器顯示“Ready to Pulse”。

2. 啟動放電后，不得觸碰儀器、電極或電轉(zhuǎn)杯。

3. 放電過程中，若出現(xiàn)異常響聲或煙霧，應(yīng)立即關(guān)閉電源并斷開插頭。

4. 每次放電結(jié)束后，等待5–10秒，確保內(nèi)部殘余電荷完全釋放后再取出樣品。

5. 實驗過程中禁止多人同時操作同一設(shè)備。

四、樣品及電極處理注意事項

1. 電極維護(hù)

1. 電轉(zhuǎn)杯電極表面應(yīng)保持清潔、無氧化層。
   可使用無水乙醇或去離子水擦拭；禁止使用酸堿性清洗劑。

2. 實驗后立即清洗并干燥，防止鹽分結(jié)晶。

3. 電極若出現(xiàn)變形或腐蝕，應(yīng)及時更換。

2. 樣品安全處理

1. 放電后的樣品需立即放置于冰浴中冷卻1–2分鐘，防止熱損傷。

2. 生物樣品操作應(yīng)在超凈工作臺內(nèi)完成，避免污染。

3. 若使用病原體或轉(zhuǎn)基因樣品，須遵守生物安全實驗規(guī)范（BSL-2級或以上）。

3. 液體防護(hù)

1. 嚴(yán)禁液體進(jìn)入儀器內(nèi)部，防止短路或高壓擊穿。

2. 放置樣品前應(yīng)檢查電極槽是否干燥。

3. 若液體溢出，應(yīng)立即關(guān)閉電源并用干布擦拭干凈。

五、電氣安全注意事項

1. 165-2661在工作時輸出電壓高達(dá)2.5 kV，操作人員必須經(jīng)過培訓(xùn)后方可使用。

2. 嚴(yán)禁用濕手接觸設(shè)備、電纜或插頭。

3. 儀器運行時，操作人員應(yīng)保持安全距離，避免身體接觸金屬導(dǎo)體。

4. 實驗區(qū)內(nèi)不得放置易燃溶劑，如乙醇、丙酮等。

5. 設(shè)備必須連接到獨立接地插座，不得與其他電器共用電源線。

6. 當(dāng)檢測到電擊風(fēng)險（如靜電感或電流異常），應(yīng)立即停止使用并報告實驗室安全員。

六、數(shù)據(jù)與參數(shù)記錄注意事項

1. 每次實驗前后均應(yīng)記錄以下數(shù)據(jù)：

• 電壓設(shè)定值與實際值；

• 電容檔位；

• 時間常數(shù)（τ）；

• 電弧狀態(tài)；

• 樣品信息與操作人。

2. 若實驗結(jié)果出現(xiàn)異常，應(yīng)保留設(shè)備運行日志，便于后期分析。

3. USB導(dǎo)出數(shù)據(jù)時，確保文件系統(tǒng)正確卸載，避免損壞記錄文件。

4. 不得擅自修改設(shè)備內(nèi)部系統(tǒng)時間或程序參數(shù)。

七、維護(hù)與清潔注意事項

1. 日常維護(hù)

2. 禁止事項

• 禁止拆卸主機(jī)外殼，內(nèi)部含高壓電路；

• 禁止使用未經(jīng)認(rèn)證的替代電轉(zhuǎn)杯或電極；

• 禁止自行更換內(nèi)部電容、電源模塊；

• 禁止堵塞通風(fēng)孔或在通風(fēng)口放置物體。

3. 長期停用管理

若設(shè)備超過3個月未使用：

1. 應(yīng)斷開電源并覆蓋防塵罩；

2. 存放環(huán)境濕度≤50%；

3. 定期通電30分鐘以防電容老化。

八、常見錯誤與處理建議

九、安全操作規(guī)范

1. 每次實驗均應(yīng)由一名主操作者與一名觀察員共同進(jìn)行，確保安全監(jiān)控。

2. 若儀器長期使用，應(yīng)建立設(shè)備運行日志，記錄維護(hù)與校驗歷史。

3. 實驗室應(yīng)配置滅火器、急救包及防電擊絕緣墊。

4. 若發(fā)生設(shè)備冒煙、異味或響聲異常，應(yīng)立即斷電并上報管理人員。

5. 實驗過程中禁止使用移動電話及其他電子設(shè)備靠近高壓區(qū)。

十、實驗結(jié)果與設(shè)備保護(hù)的協(xié)同要點

1. 能量控制與細(xì)胞活性平衡

• 不可追求過高電壓，應(yīng)以細(xì)胞存活率為主要參考；

• 實驗條件需通過逐步優(yōu)化獲得。

2. 溫度控制的重要性

• 高能量放電會導(dǎo)致局部溫升，須使用冰浴控制在4°C；

• 避免樣品因熱累積而影響膜修復(fù)。

3. 電場均勻性保障

• 電轉(zhuǎn)杯必須保持水平放置；

• 液體覆蓋電極完全且無氣泡。

4. 重復(fù)性實驗的標(biāo)準(zhǔn)化

• 同一條件下進(jìn)行重復(fù)實驗至少3次，記錄所有參數(shù)；

• 時間常數(shù)偏差≤0.2 ms視為設(shè)備性能穩(wěn)定。

十一、人員與實驗室管理要求

1. 操作人員應(yīng)具備電生理或分子生物學(xué)實驗基礎(chǔ)，熟悉高壓安全知識。

2. 使用前必須經(jīng)過設(shè)備培訓(xùn)，掌握儀器結(jié)構(gòu)與急停操作。

3. 儀器操作手冊應(yīng)放置在設(shè)備旁便于查閱。

4. 實驗室應(yīng)設(shè)立專人管理，負(fù)責(zé)設(shè)備借用、維護(hù)及校準(zhǔn)記錄。

5. 所有維護(hù)操作須由專業(yè)技術(shù)人員執(zhí)行，嚴(yán)禁自行拆卸。

十二、特殊實驗條件下的附加注意事項

1. 高濃度DNA或大分子轉(zhuǎn)染

• 溶液粘度增大時需降低電壓或電容，防止能量過度集中。

2. 大體積電穿孔實驗

• 應(yīng)使用0.4 cm電轉(zhuǎn)杯，并在兩次放電間隔至少60秒。

3. 連續(xù)多樣品電擊

• 建議每10次放電后關(guān)閉儀器休息10分鐘，以延長元件壽命。

4. 低溫環(huán)境操作

• 環(huán)境溫度低于15°C時，充電時間將延長，應(yīng)適當(dāng)調(diào)整操作節(jié)奏。

5. 高濕季節(jié)使用

• 需加裝除濕設(shè)備，防止電極凝露導(dǎo)致電弧放電。

十三、設(shè)備使用壽命與可靠性維護(hù)

• 平均無故障運行時間（MTBF）超過8000小時；

• 若嚴(yán)格遵守操作規(guī)范，主機(jī)可穩(wěn)定運行8年以上；

• 建議每年進(jìn)行一次專業(yè)性能驗證，包括電壓輸出、時間常數(shù)與安全系統(tǒng)檢測；

• 過載、頻繁放電及濕度過高將顯著縮短設(shè)備壽命。